Moleculaire Diagnostiek: real-time PCR

Momenteel, moleculaire diagnostiek mechanisme polymerasekettingreactie (PCR), waarbij de impuls voor de ontwikkeling van een groot aantal was diagnose- ziekten, gebaseerd op de bepaling van genetisch materiaal. Voor het uitvoeren van real-time PCR met behulp genfragment (met name het nucleïnezuur) van het veroorzakende agens, die niet in andere individuen.

Het principe van PCR is de vermenigvuldiging van een bepaald pathogeen DNA-fragment miljoenen keren door DNA polymerase in een speciale eenheid, aangeduid als de thermische cycler, die een cyclische herhaling van de temperatuur regeling voor een bepaald programma biedt.

Diagnostische PCR maakt een reeks amplificaties herhalen, behoud van de enzymactiviteit. Wanneer de amplificatie soepel verloopt, in een cyclus van het aantal kopieën van een bepaald stuk DNA van het pathogeen doubles, na dertig cycli - honderd en tien. Dat is de reden waarom PCR wordt gebruikt bij de diagnose te klein genoeg ziekteverwekkers, de identificatie van wat onmogelijk is zonder dat te bepalen.

Opgemerkt wordt dat het RNA geen matrijs voor PCR in real time kunnen worden. Daarom, om viraal RNA te detecteren voordat de amplificatie noodzakelijk een DNA correleren met het overeenkomstige fragment te verkrijgen. De polymerasekettingreactie maakt aan DNA en RNA meting pathogeen. De aldus verkregen informatie wordt gebruikt voor het bewaken van de effectiviteit van de therapie gebruikt, en de evaluatie van de klinische prognose.

Bovendien is real-time PCR geen extra handelingen ten opzichte van de decodering van het doelwit DNA of amplicons, welke als een belemmering voor de juiste diagnose dienen vereisen en leiden tot foutieve resultaten. Deze benadering maakt het mogelijk niet de elektroforesestap, wat leidt tot een risicovermindering producten van de polymerasekettingreactie. Ook als gevolg van de vermindering van het aantal manipulaties met het middel, vermindert de tijd van het onderzoek vereenvoudigt het proces vermindert de kans op fouten. PCR kunt u ook het oorspronkelijke aantal kopieën van het DNA van de ziekteverwekker te geven in een klinische proef te helpen identificeren periodes van exacerbaties en om tijdig maatregelen te nemen om de patiënt te genezen te nemen.

Vandaag zijn er een groot aantal van de amplificatiewerkwijzen volgens fixatie in real time. De meest gebruikte verschillende technieken toepassen amplicon gecorreleerd met fluorogene probes, de stralingsintensiteit die varieert afhankelijk van de ophoping van amplicon in real time vastgelegd met behulp van een speciaal apparaat genaamd een thermocycler met een optische module. Het biedt een grote gevoeligheid van de analyse. Op hetzelfde PCR-product kan worden gedetecteerd met een grote hoeveelheid bijproducten, in een tijd waarin het gebruik van elektroforese in sommige gevallen niet opgemerkt.

Door PCR met behulp van positieve en negatieve controlemonsters in real time. Aldus positieve en negatieve monsters in een studie geanalyseerd als afzonderlijke monsters een controlemonster waarbij wordt ingebracht in elk dergelijk monster en voldoet aan alle analysestappen.

Tegenwoordig zijn er een groot aantal inrichtingen voor het uitvoeren van de polymerase kettingreactie. Deze omvatten Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid en Roche. Elk van hen heeft zijn voor- en nadelen

Opgemerkt dient te worden dat de PCR - methode voor de diagnose gebruikt in grootschalige wetenschappelijke onderzoek en diagnostische centra over de hele wereld, omdat het de mogelijkheid directe interpretatie van de resultaten uit te voeren geeft.